以克羅諾桿菌屬具有代表性的2?株模式菌株(丙二酸鹽陽(yáng)性克羅諾桿菌和阪崎腸桿菌)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,建立了一套集一步法DNA提取和快速實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)法檢測(cè)為一體的速測(cè)技術(shù)體系。通過(guò)優(yōu)化,建立的快速real-time PCR程序可將擴(kuò)增時(shí)間由普通程序的82?min縮短至27?min?18?s。建立的一步快速DNA提取流程,取樣后僅需12?min熱循環(huán)反應(yīng)即可直接獲取DNA,簡(jiǎn)便快捷。與傳統(tǒng)方法的對(duì)比結(jié)果顯示,快提法與傳統(tǒng)煮沸法對(duì)純菌液和人工污染培養(yǎng)前6?h的樣品靈敏度一致;對(duì)人工污染樣品培養(yǎng)7、8?h時(shí),快檢法的靈敏度比傳統(tǒng)方法低1 個(gè)數(shù)量級(jí)。本研究建立的微生物速測(cè)技術(shù)快速、簡(jiǎn)便且具有較高靈敏度,在口岸食源性病源微生物現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方面具有較好的應(yīng)用前景。
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