對傳統(tǒng)的對羥基聯(lián)苯法進行了優(yōu)化,應(yīng)用于定量測定發(fā)酵液中的乳酸。首先對發(fā)酵液進行適當(dāng)預(yù)處理,去掉蛋白質(zhì)和葡萄糖,再利用正交設(shè)計對影響顯色的幾個重要因素進行了優(yōu)化,結(jié)果表明,最佳測定波長為565nm;最佳顯色條件為氫氧化鈣0.05g,20%硫酸銅0.8ml,濃硫酸6ml,0.5%對羥基聯(lián)苯0.125ml,靜置時間15min,加熱顯色時間5min。標(biāo)準曲線回歸方程為A=0.0189C-0.0808(n=8),r=0.9989。在15~50μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。平均回收率為102.4%。顯色穩(wěn)定保持2h以上,RSD為2.6%(n=12)。該方法解決了傳統(tǒng)對羥基聯(lián)苯法顯色時間長、準確度不高等問題,適合于發(fā)酵液中乳酸含量的測定。
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