以制備好的抗血清為基礎(chǔ)優(yōu)化間接酶聯(lián)免疫吸附法的測定條件。采用間接酶聯(lián)免疫吸附法測定己烯雌酚抗血清效價,用方陣滴定法確定包被濃度和抗血清工作濃度,進(jìn)而優(yōu)化稀釋緩沖液﹑pH﹑競爭時間等實驗條件。選擇與DES結(jié)構(gòu)類似的四種藥物進(jìn)行交叉反應(yīng),計算交叉反應(yīng)率。結(jié)果表明產(chǎn)生的抗血清的稀釋度可以達(dá)到1:102400。方陣滴定法確定最佳包被濃度和抗血清工作濃度分別為1:200和1:4000。通過間接ELISA方法建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線,抑制曲線表明,兔抗血清中抗體特異性很好,呈現(xiàn)線性關(guān)系,其IC50為1.89ng/ml,最低檢測限為0.08ng/ml。四種DES結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率除雙烯雌酚3.1%外,其余均小于0.1%。從而優(yōu)化了間接酶聯(lián)免疫檢測條件,建立了己烯雌酚實用的檢測方法,為最終組裝試劑盒奠定了基礎(chǔ)。
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