領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
乳桿菌的遺傳轉(zhuǎn)化是限制對其遺傳操作的關(guān)鍵因素之一。本實驗用廣宿主質(zhì)粒pHY300PLK電轉(zhuǎn)化植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)B0080,并優(yōu)化了轉(zhuǎn)化條件。系統(tǒng)地考察了細胞的生長時期、生長培養(yǎng)基組分、質(zhì)粒濃度、電擊時電場強度、復(fù)蘇培養(yǎng)基組分等因素對轉(zhuǎn)化效率的影響。選擇含5.13%甘氨酸和0.54mol/L蔗糖的MRS培養(yǎng)基制備乳桿菌受體細胞,加入500ng質(zhì)粒DNA,在電場強度7.41kV/cm電擊轉(zhuǎn)化,以含有0.3mol/L蔗糖的MRS培養(yǎng)基復(fù)蘇培養(yǎng),獲得最佳轉(zhuǎn)化率為3.6×104CFU/μg DNA,比使用初始方法得到的轉(zhuǎn)化率提高了40倍。采用優(yōu)化后條件,同樣實現(xiàn)了pHY300PLK、pBBR1MCS-5對L.amylovorus B0112和L.acidophilus B0068的高效轉(zhuǎn)化,為進一步對這些菌株進行基因工程改造奠定了有利的方法學(xué)基礎(chǔ)。
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