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—— 中國食品雜志社
目的:表達抗克倫特羅(CBL)可溶性單鏈抗體(scFv)并進行抗原結合活性鑒定。方法:利用呈現(xiàn)scFv的重組噬菌體感染大腸桿菌HB2151,IPTG誘導可溶性scFv表達。滲透休克法提取菌體細胞周質(zhì)腔中scFv。經(jīng)SDS-PAGE、Western-Blotting以及間接ELISA法分析檢測可溶性scFv的表達,并采用間接競爭ELISA法鑒定scFv的抗原結合活性。結果:細菌培養(yǎng)上清及周質(zhì)腔中均有抗CBL可溶性scFv表達,其分子量約為29kD;上清液及周質(zhì)腔中scFv效價分別為1:80,1:1600,能夠被CBL競爭性抑制,IC50分別為0.78、0.95ng/ml。結論:可溶性抗CBLscFv在大腸桿菌HB2151中獲得成功表達,表達的scFv與CBL具有很好的結合活性,可用于進一步建立CBL相應的免疫學檢測方法。
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