本實驗通過研究酶種類、菌齡、酶濃度及酶的作用時間、菌體預(yù)處理及滲透壓穩(wěn)定劑等不同因素對原生質(zhì)體形成與再生的影響,得出了青稞酒曲酵母ZY2,ZY8原生質(zhì)體制備和再生的最佳條件:酵母ZY2在菌齡為10h,0.1mol/LEDTA+0.1%β-巰基乙醇為預(yù)處理劑作用10min;30℃下用1.5%的蝸牛酶酶解1h;酵母ZY8在菌齡為10h,0.1mol/LEDTA+20mmol/L2-硫蘇糖醇混合于蝸牛酶1.5%+溶壁酶1%的酶解體系中,30℃下酶解1h;配制酶解液時滲透壓穩(wěn)定劑采用0.7mol/LKC1,在稀釋及配制再生培養(yǎng)基時采用17%蔗糖的條件下,酵母ZY2形成率達(dá)94.15%,再生率達(dá)13.85%;酵母ZY8形成率達(dá)88.78%,再生率達(dá)23.02%。
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