本實(shí)驗(yàn)研究了離子交換色譜技術(shù)大規(guī)模純化乳鐵蛋白的色譜條件。選用的SP Sepharose Fast Flow離子交換劑對(duì)乳鐵蛋白有很好的吸附選擇性,洗脫速度可達(dá)到2L/h。以pH值為7.7~8.0,10mmol/L的磷酸鹽為起始緩沖液,通過改變離子強(qiáng)度進(jìn)行分步洗脫。先采用0.5mol/L的NaCl溶液選擇性洗脫分泌型免疫球蛋白A和乳過氧化物酶組分,再采用1mol/L的NaCl洗脫LF組分。經(jīng)SDS-PAGE測(cè)定,所得乳鐵蛋白組分顯示為單一區(qū)帶,相對(duì)分子質(zhì)量為80400Da。經(jīng)等點(diǎn)聚焦測(cè)定,所得乳鐵蛋白的等電點(diǎn)為8.65。中試生產(chǎn)的精制品中乳鐵蛋白的純度和回收率分別為94.20%和75.45%。
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