以牡蠣肉為原料制備二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV,EC 3.4.14.5)抑制肽。通過對(duì)比5 種蛋白酶(木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶)制備的酶解液對(duì)DPP-IV的抑制活性,發(fā)現(xiàn)胰酶制備的酶解液對(duì)DPP-IV抑制效果最好。通過優(yōu)化胰酶酶解條件,確定最優(yōu)酶解條件為加酶量0.8%、pH 8.0、溫度37 ℃,酶解時(shí)間90 min。酶解液經(jīng)超濾、Sephadex G-15和高效液相色譜分離純化,獲得肽片段。通過質(zhì)譜鑒定篩選得到2 種肽段的序列為Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys(EITALAPSTMK)和Ile-Leu-Ala-Pro-Pro-Glu-Arg(ILAPPER)。利用BIOPEP在線模擬分析了這2 個(gè)肽的胃腸液消化特性。采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并應(yīng)用于DPP-IV抑制活性研究。結(jié)果顯示,2 個(gè)肽段的IC50值分別為354.81 μmol/L和16.98 μmol/L。分子對(duì)接結(jié)果表明,抑制肽與DPP-IV的活性部位主要以氫鍵、范德華力和π鍵相互作用為主。本研究通過酶解牡蠣肉制備高抑制活性的DPP-IV抑制肽,為以牡蠣為原料的功能性食品開發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)。
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