基于十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究辣木凝乳酶對(duì)酪蛋白的酶切位點(diǎn)和水解特性,并分析該凝乳酶水解產(chǎn)生的酪蛋白糖巨肽和酪蛋白磷酸肽。結(jié)果表明,辣木凝乳酶酶切κ-酪蛋白的Arg 93-His 94位點(diǎn)導(dǎo)致凝乳,區(qū)別于其他已報(bào)道的凝乳酶,具有明顯特異性。酶作用下κ-酪蛋白的米氏常數(shù)Km=0.49 mg/mL,最大反應(yīng)速率Vm=45.2 U/min,有效促進(jìn)酪蛋白膠束的聚集和凝乳。該酶對(duì)α-、β-、κ-酪蛋白產(chǎn)生不同程度的水解,對(duì)α-酪蛋白的水解速度最快,說明其適用于軟質(zhì)奶酪的加工。以酪蛋白為底物,通過鋇-乙醇沉淀法得到酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptides,CPPs),產(chǎn)率為15.87%,得到的CPPs可以使鈣沉淀推遲23 min,有利于鈣離子被腸道有效吸收。以水牛乳為底物時(shí),乳凝固后析出的乳清中含酪蛋白糖巨肽6.61 mg/mL,糖基化程度477.527 μg/mg。研究為新型植物凝乳酶的研發(fā),及其在奶酪、酪蛋白活性肽等產(chǎn)品的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
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