目的:基于適配體結(jié)合量子點(diǎn)技術(shù),建立一種同時(shí)針對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌O157:H7兩種食源性致病菌快速高效、靈敏的檢測(cè)方法。方法:利用表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)篩選出與目標(biāo)菌結(jié)合特異性較好的2?種適配體;利用免疫磁珠與適配體偶聯(lián)技術(shù)特異性捕獲2?種目標(biāo)菌;選取不同發(fā)光原理的2?種量子點(diǎn),并結(jié)合量子點(diǎn)熒光標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建“磁珠+目標(biāo)菌+量子點(diǎn)”的“三明治結(jié)構(gòu)”,通過(guò)對(duì)結(jié)構(gòu)條件優(yōu)化確定2?種目標(biāo)菌的檢出限,并應(yīng)用到市售無(wú)菌牛乳實(shí)際樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:本研究證明所選取的2?條適配體與目標(biāo)菌的結(jié)合具有高特異性,可實(shí)現(xiàn)對(duì)2?種目標(biāo)菌的同時(shí)檢測(cè)。對(duì)“三明治結(jié)構(gòu)”優(yōu)化結(jié)果表明:2?種目標(biāo)菌的最佳捕獲條件為免疫捕獲時(shí)間45?min、磁分離時(shí)間2?min;適配體最適濃度為400?nmol/L;金黃色葡萄球菌檢出限為101?CFU/mL,線性方程為Y=28.51X+126.67(R2=0.973);大腸埃希氏菌O157:H7檢出限均為102?CFU/mL,線性方程為Y=92.86X-64.67(R2=0.987),其中,Y為熒光強(qiáng)度,X為細(xì)菌菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值,擬合度良好。且在牛乳樣品中金黃色葡萄球菌和大腸埃希氏菌O157:H7回收率分別為94.6%~102.8%和93.4%~100.4%。結(jié)論:本研究所建立的方法能夠?qū)崿F(xiàn)同時(shí)對(duì)2?種食源性致病菌快速、高效檢測(cè),該方法易操作且靈敏度高,在食品加工生產(chǎn)安全檢測(cè)方面具有良好的應(yīng)用前景。
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