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黃桿菌褐藻膠裂解酶的高效表達及其在褐藻寡糖制備中的應(yīng)用
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 112 發(fā)表時間: 2021-03-16
作者: 江君,劉軍,楊紹青,馬帥,閆巧娟,江正強
關(guān)鍵詞: 褐藻膠裂解酶;黃桿菌;枯草芽孢桿菌;高密度發(fā)酵;褐藻寡糖
摘要:

研究黃桿菌褐藻膠裂解酶基因(rFlAlyA)在枯草芽孢桿菌中的高效表達,高密度發(fā)酵48?h最高酶活力為2?550?U/mL,蛋白質(zhì)量濃度達4.5?mg/mL。經(jīng)(NH4)2SO4沉淀和SP強陽離子交換柱純化后得到電泳級純酶,分子質(zhì)量約為30?kDa。褐藻膠裂解酶rFlAlyA最適pH值為7.5,在pH?4.0~11.0范圍內(nèi)可保持80%以上酶活力;最適溫度為50?℃,在50?℃及以下可保持80%以上酶活力。底物特異性分析表明,rFlAlyA特異性降解聚甘露糖醛酸片段,最短鏈底物為甘露糖醛酸三糖。rFlAlyA在最適條件下酶解褐藻酸鈉4?h后還原糖質(zhì)量濃度達33?mg/mL,底物轉(zhuǎn)化率為70.1%,電噴霧電離-質(zhì)譜分析酶解產(chǎn)物的聚合度(degree of polymerization,DP)為1~8,離子色譜分析顯示DP=3時相對含量最高,為34.0%。結(jié)果表明,經(jīng)枯草芽孢桿菌高效表達的rFlAlyA可用于制備褐藻寡糖。

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