目的:在細(xì)胞分子層面揭示夏枯草蜂蜜提取物對硫酸葡聚糖(dextran sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的人結(jié)腸上皮細(xì)胞(Caco-2)損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。方法:以洋槐蜂蜜為對照,分別采用福林-酚法和硝酸鋁法測定兩種蜂蜜中總酚酸含量和總黃酮含量;通過測定1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2’-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)自由基清除能力、半抑制濃度和鐵離子抗氧化能力評估兩種蜂蜜的體外抗氧化能力;通過建立DSS誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型,結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、免疫印跡實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)研究夏枯草蜂蜜提取物對潰瘍性結(jié)腸炎的保護(hù)作用。結(jié)果:夏枯草蜂蜜的總酚酸含量為(52.4±0.4)μg/g,總黃酮含量為(7.0±0.3)μg/g;通過建立體積分?jǐn)?shù)2.5% DSS誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞損傷模型,發(fā)現(xiàn)夏枯草蜂蜜提取物在質(zhì)量濃度50~100 μg/mL時(shí)能顯著緩解DSS處理所導(dǎo)致的細(xì)胞活力下降;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)發(fā)現(xiàn)夏枯草蜂蜜提取物預(yù)處理可顯著上調(diào)抗氧化蛋白基因(NQO-1、Txnrd1和Nrf2)和緊密連接蛋白基因(ZO-1)的表達(dá);免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明夏枯草蜂蜜提取物預(yù)處理可顯著拮抗DSS對緊密連接蛋白(ZO-1)的損傷;免疫印跡實(shí)驗(yàn)分析表明夏枯草蜂蜜提取物預(yù)處理可顯著促進(jìn)抗氧化蛋白(NQO-1、Txnrd1和Nrf2)的表達(dá)。結(jié)論:夏枯草蜂蜜可緩解DSS對腸上皮細(xì)胞屏障功能的破壞,具有良好的開發(fā)利用價(jià)值。
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