建立檢測雞肉中金剛烷胺的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法。利用N-(1-金剛烷胺基)肼甲酰胺與乙醛酸合成新式金剛烷胺半抗原,采用活潑酯法將金剛烷胺半抗原分別與血藍蛋白、牛血清白蛋白偶聯(lián)合成免疫原和包被原,將所制備的人工抗原免疫BALB/c小鼠,并制備特異性識別金剛烷胺的單克隆抗體。ic-ELISA法經(jīng)系統(tǒng)優(yōu)化后,最佳包被原稀釋倍數(shù)為80 000,抗體工作質(zhì)量濃度為122.50 μg/L,對金剛烷胺的IC50為0.69 μg/L,檢出限為0.21 μg/L,在0.07~6.15 μg/L之間線性良好,雞肉樣品中添加回收率為101.69%~108.71%,變異系數(shù)均低于15%,且實際樣品檢測結(jié)果與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定結(jié)果相關性良好(R2=0.97),表明建立的ic-ELISA具有良好的準確度和可靠性。利用該特異性抗體建立的方法適用于實際雞肉樣品中金剛烷胺的快速檢測。
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