領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
針對目前食品級葡萄糖氧化酶的工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)量不高，選擇黑曲霉CBS513.88的葡萄糖氧化酶基因goxC，通過密碼子優(yōu)化、信號肽替換對其編碼區(qū)進(jìn)行改造，并利用強(qiáng)啟動(dòng)子PglaA、雜合啟動(dòng)子Pna2/tpi及營養(yǎng)缺陷標(biāo)記pyrG構(gòu)建表達(dá)載體，旨在構(gòu)建高活力的葡萄糖氧化酶表達(dá)工業(yè)菌株。goxC表達(dá)載體轉(zhuǎn)化低蛋白背景的黑曲霉SH2原生質(zhì)體后，經(jīng)營養(yǎng)缺陷標(biāo)記pyrG篩選獲得重組菌株，鄰聯(lián)茴香胺顯色和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳結(jié)果顯示，在SH2宿主中成功表達(dá)葡萄糖氧化酶，蛋白質(zhì)大小約為80 kDa。500 mL搖瓶發(fā)酵在第7天時(shí)酶活力可達(dá)563.8 U/mL；50 L發(fā)酵罐發(fā)酵在179 h時(shí)酶活力最高，達(dá)到1 128 U/mL，相比搖瓶發(fā)酵提高了1 倍多，在目前曲霉表達(dá)系統(tǒng)的相關(guān)表達(dá)研究中，本研究葡萄糖氧化酶表達(dá)量已達(dá)到較高的水平。酶學(xué)性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn)，重組葡萄糖氧化酶最適pH值為5.5，最適溫度為45 ℃。綜上所述，本研究成功實(shí)現(xiàn)了葡萄糖氧化酶在黑曲霉中的高效重組表達(dá)。
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