目的:研究榆干離褶傘溶栓酶(fibrinolytic enzyme from Lyophyllum ulmarium,LUFE)對酒精所致人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)損傷的保護作用及其機制。方法:以酒精誘導HUVECs損傷,四甲基偶氮唑藍法檢測細胞活力,檢測細胞培養(yǎng)上清液乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力;比色法檢測細胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;吖啶橙-溴化乙啶雙染法觀察細胞凋亡;用熒光染料雙氫羅丹明123和羅丹明123分別檢測細胞總活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和線粒體跨膜電位;蛋白印跡法檢測Bax、Bcl-2、細胞色素c、cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved caspase)-9和cleaved caspase-3的表達水平。結果:LUFE能夠提高內皮細胞存活率,降低LDH和MDA水平,提高SOD、GSH-Px活力,減少ROS的生成,并抑制酒精所致的線粒體跨膜電位的下降和細胞凋亡。Western blot結果表明,LUFE提高Bcl-2蛋白表達水平,并減少細胞色素c、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表達。結論:LUFE對酒精所致血管內皮細胞的損傷有保護作用,其機制可能與其抗氧化、抑制酒精誘導的線粒體途徑細胞凋亡有關。
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