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熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌方法的建立與評(píng)價(jià)
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 183 發(fā)表時(shí)間: 2018-01-15
作者: 張晨曦,劉釗,潘偉,賈贇,吳斌
關(guān)鍵詞: 乳及乳制品;實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);結(jié)核病;結(jié)核分枝桿菌
摘要:

建立一種快速檢測(cè)乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌的熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法.根據(jù)結(jié)核分枝桿菌保守序列設(shè)計(jì)特異引物,建立結(jié)核分枝桿菌的實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)法.對(duì)該方法的靈敏度、特異度和重復(fù)性進(jìn)行考察.結(jié)果表明:建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=-3.29x+38.60 (R2=0.998 0);敏感性高,可達(dá)1×102 copies/μL;抗干擾能力強(qiáng),僅結(jié)核分枝桿菌出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線;重復(fù)性良好,分別用不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒進(jìn)行組內(nèi)和組間平行實(shí)驗(yàn),批內(nèi)和批間的變異系數(shù)均小于1%.因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法能準(zhǔn)確快速檢測(cè)乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌.

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