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—— 中國食品雜志社
構建一種基于雜交鏈式反應（hybridization chain reaction，HCR）擴增的適配體磁珠熒光傳感器。巧妙設計序列HP和發(fā)卡序列H1、H2，其中HP是由適配體序列與觸發(fā)序列結合而成的，并且序列互補形成穩(wěn)定的二級結構。然后采用戊二醇反應和親和素-生物素反應進行適配體功能化磁珠的制備。將阪崎腸桿菌與適配體磁珠一起孵育，HP中的適配體序列識別靶標，引起HP構象變化，露出觸發(fā)序列，通過HCR觸發(fā)H1和H2的鏈狀組裝，產生長雙鏈DNA。熒光指示劑SYBR Green I以插層和小槽結合的方式與HCR產物的長雙鏈結合。最后加入氧化石墨烯（graphene oxide，GO）后，游離的H1、H2和SYBR Green I將通過π-π堆積緊密吸附在GO表面，熒光信號被猝滅。HCR產物不能被吸附在GO表面，因此與HCR產物結合的SYBR Green I發(fā)出依賴于靶濃度的強熒光信號，從而實現(xiàn)阪崎腸桿菌的定量檢測。本方法在純培養(yǎng)條件下的檢出限為2 CFU/mL，對奶粉的檢出限為8 CFU/g，對奶粉樣品的檢測結果與傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)法具有良好的一致性。該方法具有無需DNA提取，快速、穩(wěn)定性高、高特異性和高靈敏度等優(yōu)點，因此為阪崎腸桿菌的現(xiàn)場快速檢測提供了一種很有潛力的方法。
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