以蘑菇酪氨酸酶為靶點(diǎn),采用抑制動力學(xué)、熒光光譜分析結(jié)合分子對接模擬技術(shù),系統(tǒng)研究鞣花酸(ellagic acid,EA)對酪氨酸酶的抑制作用及機(jī)理。體外研究與動力學(xué)結(jié)果表明,EA以可逆的混合型抑制方式顯著抑制酪氨酸酶活性(IC50=0.05 mg/mL),其結(jié)合常數(shù)KI<KIS,表明EA與游離酶的結(jié)合比與酶-底物復(fù)合物的結(jié)合更緊密。熒光光譜猝滅分析表明,EA與酪氨酸酶存在靜態(tài)猝滅作用,兩者通過自發(fā)的吸熱過程結(jié)合生成復(fù)合物,主要作用力為疏水作用力,只有1 個或1 類結(jié)合位點(diǎn)。同步和三維熒光光譜分析表明,EA使酪氨酸酶的微環(huán)境極性增大,疏水能力減弱,酪氨酸酶的Trp殘基更靠近結(jié)合位點(diǎn)。分子對接模擬分析進(jìn)一步印證上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,形象地表明EA對酪氨酸酶為混合型抑制,EA主要通過疏水作用力和氫鍵與游離酶或酶-底物復(fù)合物進(jìn)行結(jié)合,最終導(dǎo)致酶活性降低。本研究對EA在食品工業(yè)中作為保鮮劑的各種應(yīng)用具有一定參考意義。
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