目的:以珍珠蚌肉為原料制備對(duì)二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase,DPP)-IV具有抑制作用的生物活性肽。方法:利用兩步酶解法并優(yōu)化珍珠蚌肉酶解條件,篩選體外DPP-IV抑制活性較高組分進(jìn)行超濾膜濃縮,SuperdexTM peptide 10/300 GL凝膠柱層析與反相高效液相色譜(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)技術(shù)分離純化出酶解液中的DPP-IV抑制肽,最終通過(guò)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜鑒定其氨基酸序列。結(jié)果:中性蛋白酶與堿性蛋白酶對(duì)珍珠蚌肉均有良好降解效果,經(jīng)3 kDa超濾膜濃縮后,酶解產(chǎn)物的DPP-IV抑制率可達(dá)67.4%。通過(guò)凝膠過(guò)濾柱和RP-HPLC進(jìn)一步分離純化出6 個(gè)活性較高的肽段,序列分別為FNAPAM、FIPNY、IYNPPTPF、LAMPYP、FFVVMP和LAGMP。進(jìn)一步,以分子對(duì)接的方式分析6 個(gè)肽段與DPP-IV的相互作用關(guān)系。結(jié)論:本研究利用珍珠蚌肉制備DPP-IV抑制肽,可為以水產(chǎn)加工副產(chǎn)物為原料制備功能性食品提供理論參考。
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