建立蜂蜜中氯霉素直接競爭酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測方法。以抗氯霉素單克隆抗體為包被原,氯霉素-辣根過氧化物偶聯(lián)物為標(biāo)記物,3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺作顯色底物,對(duì)其主要影響因素,如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、包被溫度、包被抗體稀釋倍數(shù)等6?個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化,同時(shí)還對(duì)該方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性進(jìn)行考察。結(jié)果表明:所建立的直接競爭ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式為y=-17.425x+97.509,相關(guān)系數(shù)R2為0.991?2,IC50值為0.63?ng/mL,檢出限和線性檢測范圍分別為(0.04±0.01)ng/mL和0.10~4.17?ng/mL;另外整個(gè)檢測反應(yīng)過程耗時(shí)約為40?min。蜂蜜樣品的檢出限和定量限分別為0.15?ng/g和0.33?ng/g,添加回收率在97.58%~100.94%之間,批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)均小于11%,表明該方法具有高精確度和穩(wěn)定性。
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