領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
T4 DNA聚合酶（T4 DNA polymerase，T4 DP）是基因工程等相關(guān)領(lǐng)域中不可缺少的工具酶。為獲得大量高純度并具有生物活性的可溶性T4 DP，通過從T4噬菌體基因組中克隆出T4 dp基因，將其克隆到pET-22b（＋）質(zhì)粒中構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-22b（＋）-T4 dp，經(jīng)DNA測序檢測成功后，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Transetta（DE3）中進(jìn)行自誘導(dǎo)表達(dá)，通過磁珠法高效準(zhǔn)確檢測T4?DP的可溶性表達(dá)情況，并對自誘導(dǎo)的溫度和時間進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳誘導(dǎo)條件為30?℃誘導(dǎo)培養(yǎng)10?h，分別利用超聲波法、超聲波-溶菌酶法及化學(xué)裂解法對自誘導(dǎo)表達(dá)的重組菌體進(jìn)行破碎，確定最佳破碎方法為化學(xué)裂解法，分別利用Ni SepharoseTM 6 Fast Flow親和層析柱和MagNi磁珠純化重組菌體裂解后上清液中的T4 DP，MagNi磁珠能高效地純化出高純度的T4 DP，其質(zhì)量濃度為3 073.960 μg/mL，成功獲得了高純度高質(zhì)量濃度的可溶性T4 DP，并使其成功應(yīng)用于克隆載體的構(gòu)建，證明其具有較好的末端平滑化活性。
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