分選酶在細菌對宿主細胞的黏附過程中具有重要作用。為探究乳酸菌分選酶的特性及與其他致病菌分選酶的差異,以嗜酸乳桿菌ATCC4356為模板,構(gòu)建分選酶A(sortase A,SrtA)重組表達載體pET28a-SrtAΔN48,轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受態(tài)細胞Transetta(DE3)內(nèi)表達,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性。結(jié)果發(fā)現(xiàn):嗜酸乳桿菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子質(zhì)量為20kDa左右;Mg2+、Zn2+、Mn2+可提高Lap-SrtAΔN48的轉(zhuǎn)肽能力;Ca2+不會影響SrtAΔN48的活性,明顯區(qū)別于致病菌;且分選酶抑制劑查爾酮會抑制Lap-SrtAΔN48的活性。進一步通過蛋白質(zhì)同源建模分析發(fā)現(xiàn)Lap-SrtA由8條中心β桶狀結(jié)構(gòu)互相折疊而成,屬于經(jīng)典的分選酶結(jié)構(gòu),Lap-SrtA的活性位點為His137、Cys198、Arg205。
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