谷氨酸棒狀桿菌不僅可以利用葡萄糖和果糖作為碳源進(jìn)行糖類代謝,也可以利用這些碳源作為底物生產(chǎn)葡萄糖酸、甘露醇及山梨醇等產(chǎn)品。為了提高底物利用率和目的產(chǎn)物的積累量,利用代謝工程阻斷糖類代謝的磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(phosphoenolpyruvate carbohydrate phosphotransferase system,PTS)和失活相應(yīng)磷酸激酶。是實(shí)現(xiàn)此目標(biāo)的有效手段。本實(shí)驗(yàn)利用同源重組和反向篩選等技術(shù)手段,分別獲得ptsF單基因缺失工程菌CGδptsF和ptsF、ptsH、ptsI三基因缺失工程菌CGδptsFδptsHδptsI。工程菌的生長情況研究表明:在以葡萄糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上,工程菌CGδptsF和工程菌CGδptsFδptsHδptsI與野生型生長情況基本一致,說明葡萄糖代謝不受3 個(gè)基因影響;在以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上,工程菌CGδptsF和工程菌CGδptsFδptsHδptsI的生長速率分別是野生型的48.4%和29.7%,菌體濃度分別是野生型的61.6%和34.1%;在以果糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上,工程菌CGδptsF菌體濃度是野生型43.2%,工程菌CGδptsFδptsHδptsI生長為0,證明其完全阻斷了果糖代謝,同時(shí)說明果糖的PTS系統(tǒng)受ptsF、ptsH和ptsI基因編碼的PTS相關(guān)蛋白的聯(lián)合控制。果糖代謝阻斷工程菌的獲得,為進(jìn)一步構(gòu)建以果糖原型為底物的甘露醇或山梨醇生產(chǎn)工程菌株提供了遺傳資源,也為谷氨酸棒狀桿菌的糖類代謝研究提供了理論依據(jù)。
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