領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
根據(jù)畢赤酵母密碼子的偏好性，通過在線軟件對(duì)Thermomyces lanuginosus脂肪酶基因（tll）和透明顫菌血紅蛋白基因（vhb）進(jìn)行密碼子優(yōu)化。優(yōu)化后的脂肪酶基因（tll-opt）和透明顫菌血紅蛋白基因（vhb-opt）中堿基GC含量分別由原來的46%提高到49%和42%提高到51%，堿基A、T、C、G均勻分布，減少了AT和GC富集區(qū)，利于tll-opt和vhb-opt基因在畢赤酵母X33中的表達(dá)。將tll和tll-opt連接到表達(dá)載體pPICZαA并轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33中。搖瓶培養(yǎng)條件下，含有tll和tll-opt重組工程菌的最大酶活力分別為7 U/mL和16 U/mL。50 L發(fā)酵罐培養(yǎng)條件下，含有tll和tll-opt重組工程菌的最大酶活力分別為201 U/mL和430 U/mL。為了進(jìn)一步提高含tll-opt重組工程菌的表達(dá)酶活性，將vhb-opt轉(zhuǎn)入該重組工程菌得到工程菌VHb＋（含有tll-opt和vhb-opt）。重組工程菌VHb＋在搖瓶培養(yǎng)條件下最大酶活力為23 U/mL，分別是優(yōu)化后基因和原始基因最大表達(dá)酶活力的1.39 倍和3.28 倍。重組工程菌VHb＋在50 L發(fā)酵罐瓶培養(yǎng)條件下最大酶活力為610 U/mL，分別是優(yōu)化后基因和原始基因最大表達(dá)酶活力的1.41 倍和3.03 倍。
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