目的:研究染料木黃酮是否通過雌激素受體介導(dǎo)影響3T3-L1前脂肪細胞成脂分化,并探討其可能的機制。方法:以不同濃度染料木黃酮處理3T3-L1細胞,四甲基偶氮唑藍(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法測定細胞存活率;在3T3-L1前脂肪細胞成脂分化過程中分別加入不同濃度染料木黃酮、染料木黃酮和ICI182780(一種雌激素受體抑制劑)混合物及不同濃度雌二醇,油紅染色觀察分化結(jié)果,測定細胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量;染料木黃酮、染料木黃酮和ICI182780混合物及不同濃度雌二醇處理誘導(dǎo)成熟后的脂肪細胞,測定培養(yǎng)液甘油含量;分別用染料木黃酮(30 μmol/L)、染料木黃酮(30 μmol/L)和ICI182780混合物干預(yù)細胞成脂分化,Western blotting法檢測細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p-ERK、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK、激素敏感性脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,F(xiàn)AS)蛋白表達量。結(jié)果:3T3-L1細胞存活率隨染料木黃酮濃度的升高而降低,50~200 μmol/L染料木黃酮能抑制細胞生長(P<0.01);染料木黃酮能負向調(diào)節(jié)成脂分化后細胞胞漿內(nèi)TG含量,在0~50 μmol/L濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴關(guān)系,高劑量雌二醇(100 nmol/L)能下調(diào)TG含量;染料木黃酮能促進成熟脂肪細胞脂解,提高細胞培養(yǎng)液甘油濃度;染料木黃酮(30 μmol/L)能上調(diào)p-AMPK、HSL蛋白表達,下調(diào)FAS蛋白表達(P<0.01),對ERK、p-ERK、AMPK表達量無明顯影響(P>0.05)。ICI182780(1 μmol/L)能部分阻斷染料木黃酮(30 μmol/L)對p-AMPK的調(diào)節(jié)作用(P<0.05)。結(jié)論:染料木黃酮能抑制3T3-L1細胞成脂分化,其機制可能是染料木黃酮一方面下調(diào)FAS蛋白表達,抑制脂肪合成,另一方面激活A(yù)MPK-HSL途徑促進脂肪分解;染料木黃酮還可能通過非雌激素受體途徑抑制3T3-L1細胞成脂分化。
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