目的:研究葉瓜參長(zhǎng)鏈堿(long-chain base from the sea cucumber Cucumaria frondosa,Cf-LCB)對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的作用,并探討其作用機(jī)制。方法:以四甲基偶氮唑藍(lán)(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法檢測(cè)Cf-LCB對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖活性的影響;采用傳統(tǒng)雞尾酒法誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞,分別采用油紅O染色和甘油三酯(triglycerides,TG)含量測(cè)定法評(píng)價(jià)其對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響;反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantity real-time reverse transcript polymerase chain reaction,qRT-PCR)法檢測(cè)脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)以及WNT/β-catenin通路關(guān)鍵基因WNT10b(wingless-type MMTV integration site family members)、卷曲蛋白1(frizzled protein1,F(xiàn)Z1)、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LDL-receptor-related protein6,LRP6)和β-連環(huán)蛋白(β-catenin)的mRNA表達(dá)水平;Western blotting法檢測(cè)WNT/β-catenin通路關(guān)鍵基因LRP6和β-catenin的蛋白表達(dá)量。結(jié)果:Cf-LCB能顯著抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖;抑制3T3-L1細(xì)胞脂滴形成以及C/EBPα和PPARγ mRNA表達(dá);顯著上調(diào)WNT/β-catenin通路關(guān)鍵基因FZ1、LRP6和β-catenin mRNA表達(dá),對(duì)WNT10b的表達(dá)無(wú)影響;顯著促進(jìn)LRP6和β-catenin的蛋白表達(dá),提高核內(nèi)β-catenin含量。結(jié)論:Cf-LCB能夠顯著抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化,其作用機(jī)制與激活WNT/β-catenin通路有關(guān)。
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