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抗瓜類細(xì)菌性果斑病菌單克隆抗體的制備及特性鑒定
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 133 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 曾海娟,王廣彬,郭慧琴,邱 實(shí),李建武,翟緒昭,丁承超,宋春美,劉 箐
關(guān)鍵詞: 細(xì)菌性果斑病菌;單克隆抗體;制備;特性鑒定
摘要:

以瓜類細(xì)菌性果斑病菌燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N(Acidovorax avenae subsp. citrulli,Aac)野生型菌株SD01免疫BALB/c小鼠,間接酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法篩選獲得4 株穩(wěn)定分泌抗SD01菌株的單克隆雜交瘤細(xì)胞株6F、6D、7E、4F,腹水抗體效價(jià)分別為1∶102 400、1∶102 400、1∶25 600、1∶51 200。采用飽和硫酸銨沉淀及Protein-G親和層析法純化腹水,十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)顯示純化后的單克隆抗體(mAb)純度較高,純化后單克隆抗體(2 mg/mL)效價(jià)分別為1∶12 800、1∶6 400、1∶3 200、1∶6 400,亞型鑒定結(jié)果表明4 種單克隆抗體均為IgG2 a。間接ELISA結(jié)果表明,4 種單克隆抗體對(duì)8 種果斑病菌結(jié)合能力不同:6F可以結(jié)合6 種,6D、4F可以結(jié)合8 種,7E可以結(jié)合5 種。與3 種非Aac近源種植物病原菌交叉反應(yīng)情況為:6F、4F與2 種非Aac近源種植物病原菌存在交叉反應(yīng),6D、7E與3 種非Aac近源種植物病原菌均無交叉反應(yīng)。

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