本實驗選用一種鎘含量較高的大米為原料,采用堿法提取大米蛋白(alkali-extractable protein,AP),依次用熱變性和乙醇沉淀分離AP,制備大米鎘結合蛋白(rice Cd-binding protein,RCBP),并分析了RCBP的紫外吸收特征、氨基酸組成、分子質量及二級結構。結果顯示:AP、熱變性蛋白(thermally denaturated protein,TP)和乙醇沉淀蛋白(ethanol-precipitated protein,EP)均在210 nm波長處有最大吸收峰,氨基酸組成類似;熱變性去除了分子質量為94 kD的蛋白質,分子質量為5 094 kD的蛋白質含量減少,乙醇沉淀進一步減少了分子質量分別為50 kD和14 kD的蛋白質。AP的二級結構主要為α-螺旋和β-轉角,有少量β-折疊;TP的二級結構只含有β-折疊和β-轉角,且以β-折疊為主;EP的二級結構主要為β-折疊和β-轉角,還含有少量α-螺旋和無規(guī)卷曲。表明熱變性和乙醇沉淀使得AP中的鎘結合蛋白得到分離,可以作為一種分離RCBP的方法。
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