對前期設(shè)計的來源于淀粉液化芽孢桿菌DSM 1061的3 種中性植酸酶突變體(D148E/H149R、Q67E/N68R、D191E)的穩(wěn)定性及催化效率等進行研究,并對影響其性質(zhì)的結(jié)構(gòu)因素進行分析。結(jié)果表明:與野生酶相比,在85 ℃條件下,突變體D191E半衰期延長了4.3 min,但催化效率下降為野生酶的48.9%;突變體D148E/H149R催化效率為野生酶的229%,半衰期與野生酶基本一致;突變體Q67E/N68R催化效率為野生酶的93%,半衰期延長了0.7 min。圓二色光譜分析結(jié)果顯示,D148E/H149R催化效率提高最為顯著,α-螺旋含量由野生酶中11.79%降至2.90%,無規(guī)卷曲含量增加;Q67E/N68R性質(zhì)與野生酶接近,其二級結(jié)構(gòu)變化最小;D191E催化效率降低,α-螺旋含量增加至24.59%。對野生酶和突變酶的同源模型分析發(fā)現(xiàn),殘基D191具有較大的B因子值,不利于酶的熱穩(wěn)定性,各突變殘基周圍的氫鍵有所變化。同源模型的分析也將為植酸酶的進一步改良提供理論依據(jù)。
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