以新鮮甘薯老葉為材料,經(jīng)過勻漿、硫酸銨鹽析、DEAE-Sepharose陰離子交換層析和Superdex-200凝膠層析等步驟后,經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定獲得了電泳純的酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP),純化后ACP比活力為251.49 U/mg,純化了169.07 倍,回收率為3.50%。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明:ACP為單亞基酶,全酶分子質(zhì)量為42.3 kD,單亞基分子質(zhì)量為41.2 kD;最適反應(yīng)溫度65 ℃,最適pH 5.2;在40 ℃以下和pH 4.0~6.0范圍內(nèi)酶活性較穩(wěn)定;以對(duì)硝基苯磷酸二鈉為底物時(shí),測(cè)得其米氏常數(shù)Km值為0.258 mmol/L;Ca2+和Mg2+對(duì)ACP酶活性有明顯激活作用,K+和Li+對(duì)ACP酶活性無(wú)影響,甲醇、乙二胺四乙酸和草酸對(duì)ACP酶活性的抑制作用較大;Hg2+和Ag+對(duì)ACP酶活性的抑制作用非常明顯。
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