目的:提高海棲熱袍菌(Thermotoga maritima MSB8)來源的木聚糖酶XynB和α-葡萄糖醛酸苷酶AguA生產效率并降低生產成本。方法:利用基因重組技術將海棲熱袍菌的XynB和AguA基因置于不同表達盒下構建共表達載體pET-20b-xynB-aguA和pET-28a-xynB-aguA,分別轉化大腸桿菌Escherichia coli JM109(DE3)進行誘導表達,獲得雙酶混合物進而水解樺木木聚糖及玉米芯。結果:重組菌E. coli JM109(DE3)/pET-28a-xynB-aguA比E. coliJM109(DE3)/pET-20b-xynB-aguA產酶更具優(yōu)勢,在LB培養(yǎng)基中誘導培養(yǎng)8 h,XynB和AguA的產量分別達到7.6 U/mL和0.5 U/mL,在TB培養(yǎng)基中培養(yǎng),XynB可達到10.27 U/mL,AguA為1.5 U/mL。在80 ℃水解條件下,雙酶比單一木聚糖酶能夠更徹底降解樺木木聚糖,所得酶解液中木二糖的含量和純度更高;從還原糖釋放量及電子顯微鏡觀察可以看出雙酶液對農副產品玉米芯具有良好的降解作用。結論:XynB和AguA基因(T. maritima)的克隆共表達具有可行性,并且在生物轉化、食品工業(yè)和飼料生產等領域具有潛在應用前景。
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