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豬背最長肌PFK-2/FBPase-2熒光定量RT-PCR方法的建立
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 171 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 李朋穎,湯曉艷,王 敏,康大成,顏成英
關(guān)鍵詞: 豬;PFK-2/FBPase-2 mRNA;SYBR Green I;熒光定量實(shí)時(shí)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
摘要:

為研究糖酵解關(guān)鍵酶果糖-6-磷酸-2激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-
bisphosphatase,PFK-2/FBPase-2)基因轉(zhuǎn)錄水平與宰后肉品質(zhì)間的關(guān)系,根據(jù)豬PFK-2/FBPase-2 mRNA序列
(GenBank登錄號(hào):NM_001143721.1)設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物并選擇β-actin作為內(nèi)參基因,構(gòu)建含有各自序列的重組
質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,通過對(duì)反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了熒光定量實(shí)時(shí)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)豬PFK-2/FBPase-2基因轉(zhuǎn)錄
水平的方法。結(jié)果表明,所建立的方法線性關(guān)系好,目的基因與內(nèi)參基因R2均大于0.999;靈敏度高,兩基因檢出
下限均為10 拷貝/μL;特異性好,擴(kuò)增產(chǎn)物均有特異性單一峰。同時(shí)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可知目的基因與內(nèi)參基因的
擴(kuò)增效率分別為104.5%和104.0%,擴(kuò)增效率接近一致,可對(duì)PFK-2/FBPase-2轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行相對(duì)定量。本研究選取
PSE肉產(chǎn)生程度不同的三元雜交豬、杜洛克豬和太湖豬,利用建立的方法對(duì)不同品種豬宰后45 min背最長肌中PFK-
2/FBPase-2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明,太湖豬轉(zhuǎn)錄水平最高、杜洛克次之、三元雜交豬最低,且3 個(gè)品
種間有顯著性差異(P<0.05)。

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