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多黏類(lèi)芽孢桿菌JSa-9電轉(zhuǎn)化方法的優(yōu)化
來(lái)源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 127 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 高 玲，鄧 陽(yáng)，陸兆新，呂鳳霞，別小妹
關(guān)鍵詞: 多黏類(lèi)芽孢桿菌JSa-9；電轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)化效率
摘要:

為建立多黏類(lèi)芽孢桿菌JSa-9菌株的高效電擊轉(zhuǎn)化體系，本實(shí)驗(yàn)研究菌體培養(yǎng)時(shí)間、電場(chǎng)強(qiáng)度、電擊緩沖液、質(zhì)粒用量以及電擊后復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)間等因素對(duì)JSa-9菌株電轉(zhuǎn)化效率的影響。結(jié)果表明：Paenibacillus polymyxaJSa-9培養(yǎng)至OD595 nm為0.3時(shí)，電轉(zhuǎn)化效率最高，為0.12×103 CFU/μg DNA；用0.5 mol/L甘露醇、0.5 mol/L山梨醇以及10%甘油的電擊緩沖液洗滌細(xì)胞，在電場(chǎng)強(qiáng)度17.5 kV/cm、電阻200 ω，電容25 μF的電擊條件下，加入1.0 μg/100 mL質(zhì)粒DNA，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)間18 h，電轉(zhuǎn)化效率達(dá)到約為0.36×103 CFU/μg DNA；制備P. polymyxa JSa-9原生質(zhì)體，在電場(chǎng)強(qiáng)度5.0 kV/cm的電擊條件下，加入0.8 μg/100 mL質(zhì)粒DNA，電轉(zhuǎn)化效率較感受態(tài)電轉(zhuǎn)提高到約1.0×103 CFU/μg DNA。

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