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腸炎沙門氏菌EMA-PCR檢測(cè)方法的建立
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 146 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 顏成英,湯曉艷,王 敏,康大成,李朋穎,鄭 鋅
關(guān)鍵詞: 疊氮溴乙錠;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);腸炎沙門氏菌
摘要:

將熒光染料疊氮溴化乙錠(ethidium monoazide,EMA)與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合,用于腸炎沙門氏菌活菌的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化結(jié)果表明,當(dāng)EMA終質(zhì)量濃度50 μg/mL、曝光時(shí)間10 min時(shí),可以抑制約107 CFU/mL腸炎沙門氏菌死菌DNA的擴(kuò)增;活菌靈敏度檢測(cè)結(jié)果顯示,EMA-PCR方法檢測(cè)限與單一PCR方法一樣均為27.5 CFU/mL,說明EMA處理既不會(huì)影響活菌DNA的擴(kuò)增也不會(huì)影響PCR方法的靈敏度。利用EMA-PCR方法檢測(cè)死活混合菌液時(shí)發(fā)現(xiàn),添加EMA的實(shí)驗(yàn)組DNA條帶亮度會(huì)隨著活菌比例的降低而變暗,且當(dāng)樣品中全是死菌時(shí),沒有目標(biāo)條帶出現(xiàn);而不添加EMA的對(duì)照組DNA條帶亮度沒有變化,當(dāng)樣品中全是死菌時(shí),目標(biāo)條帶依然清晰可見。說明添加EMA可以達(dá)到區(qū)分死活菌的目的,EMA-PCR方法只檢測(cè)樣品中的活菌,避免了死菌DNA造成假陽性的可能性。

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