以苦蕎種子灌漿期cDNA文庫中獲得的苦蕎10 kD過敏原基因序列TBAP10(tartary buckwheat 10 kD allergenprotein,TBAP10;GenBank登錄號JK729379.1)為基礎(chǔ),構(gòu)建重組表達載體pET47b-TBAP10,重組蛋白在大腸桿菌BL21 Star(DE3)中以包涵體形式表達。經(jīng)包涵體復(fù)性和鈷離子螯合層析純化目的蛋白,并對其過敏活性、熱穩(wěn)定性及在模擬胃腸環(huán)境中的穩(wěn)定性進行了分析。Western blotting顯示該蛋白與苦蕎16 kD過敏蛋白Fag t2存在免疫交叉反應(yīng)。競爭性ELISA證明重組蛋白TBAP10具有與蕎麥過敏患者血清IgE特異的結(jié)合活性;TBAP10具有強的熱穩(wěn)定性,能耐受15 min的沸水浴;模擬胃腸環(huán)境的消化結(jié)果顯示TBAP10對胃蛋白酶具有強的耐受性,但對胰蛋白酶無耐受性。
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