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高靈敏度測(cè)定殼聚糖酶活力的新方法及其比較
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 132 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 張永勤,張 杰,常海燕,張 坤,劉征東,羅彩華,牟曉鳳
關(guān)鍵詞: 殼聚糖酶;3-甲基-2-苯并噻唑酮;還原端;殼聚糖;3,5-二硝基水楊酸;鐵氰化鉀
摘要:

目的:建立一種測(cè)定殼聚糖酶活力的新方法--3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物(MBTH)法。方法:以動(dòng)力學(xué)法通過(guò)測(cè)定水解過(guò)程中殼聚糖釋放還原端基的速率來(lái)計(jì)算酶活力,并以測(cè)定纖維素酶中殼聚糖酶的微量活力為例,對(duì)測(cè)定過(guò)程中的幾個(gè)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行討論。結(jié)果:在37℃、pH6.0酶解條件下,底物殼聚糖溶液的測(cè)定質(zhì)量終濃度需達(dá)到2mg/mL以上;酶解反應(yīng)時(shí)間控制在60min內(nèi)為宜,可以用終點(diǎn)法定量測(cè)得殼聚糖酶活力。結(jié)論:通過(guò)比較MBTH法、DNS法和鐵氰化鉀法發(fā)現(xiàn)MBTH法更準(zhǔn)確、更靈敏、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)便。其檢測(cè)限為13mU/mL,而鐵氰化鉀法是該法的1.6倍,DNS法是該法的116倍。應(yīng)用本法所測(cè)其酶解殼聚糖的Km值為0.12mg/mL,而用DNS法則較難準(zhǔn)確測(cè)得。

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