領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
以重組表達(dá)銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa 41磷脂酶C的大腸桿菌BL21 (DE3)/pET28a-plcH為考察菌株，從TB培養(yǎng)基出發(fā)，在優(yōu)化緩沖液、碳源種類(lèi)和質(zhì)量濃度的基礎(chǔ)上，比較異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)、乳糖誘導(dǎo)重組酶表達(dá)的效果，并考察甘氨酸對(duì)重組酶發(fā)酵的影響；最后，在7L發(fā)酵罐規(guī)模對(duì)上述優(yōu)化工藝進(jìn)行放大驗(yàn)證。結(jié)果表明：重組大腸桿菌最適培養(yǎng)基組成為：蛋白胨12g/L、酵母膏24g/L、甘油5g/L，0.25mol/L Tris-HCl(pH7.2～7.4)緩沖液配制；在此培養(yǎng)基中添加卡那霉素(Kana)的質(zhì)量濃度至0.15mg/mL，37℃、200r/min培養(yǎng)6h后，添加乳糖至終質(zhì)量濃度為5g/L，在25℃、150r/min誘導(dǎo)培養(yǎng)20 h，重組磷脂酶C活力可達(dá)到(1422.42±37.17)U/mL；7L發(fā)酵罐實(shí)驗(yàn)中，總酶活力達(dá)到(11583.35±70.21)U/mL，比搖瓶條件下提高了7倍左右，其中胞內(nèi)酶活力最高為(10957.97±58.03)U/mL，胞外酶活力最高為(645.27±13.87)U/mL。
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