用堿性蛋白酶水解食源性明膠以制備抗凍多肽,通過控制酶解條件獲得具有抗凍活性的明膠多肽酶解液,并對其進行色譜分離、質(zhì)譜鑒定及氨基酸全序列測定。結(jié)果表明:當(dāng)酶與底物比1:15、酶解時間30min、酶解溫度45℃時,所獲得的明膠多肽酶解液的抗凍活性最高;酶解制備的明膠多肽液經(jīng)過冷-熱循環(huán)(cold-heat-stage)后抑制冰晶生長和抗凍活性表現(xiàn)出特定的規(guī)律,說明酶解條件的控制優(yōu)化是實現(xiàn)明膠多肽液抗凍活性的關(guān)鍵。通過Sephadex G-50、SP Sephadex C-25、C18-RPLC色譜分離和MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定,確定分子質(zhì)量為2107D的特異性多肽表現(xiàn)出顯著的抗凍活性。通過Edman降解法測得其氨基酸全序列為GERGFPGERGSPGAQGLQGPR。
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