在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,通過(guò)正交試驗(yàn)研究pH值、提取時(shí)間和料液比3個(gè)因素對(duì)巴西松子中蛋白酶活力的影響,得出巴西松子中蛋白酶的最佳提取緩沖液為pH9.0的硼酸-硼砂緩沖液、提取時(shí)間為60min、料液比為1:8(m/V);采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Sepharose FF陰離子交換層析分離純化巴西松子中的一種蛋白酶,結(jié)果表明:純化后蛋白酶比活力提高到了8.61倍,回收率為21.65%。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表明:該蛋白酶分子質(zhì)量為33kD。酶學(xué)性質(zhì)結(jié)果表明:該蛋白酶最適pH值為9.0,屬堿性蛋白酶;反應(yīng)的最適溫度為50℃;金屬離子Mn2+對(duì)該蛋白酶活性有強(qiáng)烈的激活作用,而Ca2+、Mg2+和Cu2+對(duì)酶活性有抑制作用。
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