為了獲得緩解泌尿系統(tǒng)草酸鹽結(jié)石病癥的酶制劑,用無載體固定化方法--交聯(lián)酶聚集體(CLEAs)制備交聯(lián)草酸脫羧酶聚集體。使用基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET32a/YvrK誘導(dǎo)表達(dá)制備草酸脫羧酶粗酶液,用30%的乙醇進(jìn)行沉淀分離提純,純化倍數(shù)為2.7倍,酶活回收率91.2%;在戊二醛添加量為0.06%、pH5、牛血清白蛋白添加量0.5g/L、4℃的條件下處理該酶2h,得到交聯(lián)草酸脫羧酶聚集體(oxdc-CLEAs),酶活回收率達(dá)95.4%;酶學(xué)性質(zhì)研究表明,相對(duì)游離草酸脫羧酶,交聯(lián)草酸脫羧酶聚集體的耐酸性、耐熱性、耐胰蛋白酶降解能力均有提高。
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