建立熒光高效液相色譜(fluorescence detector-high performance liquid chromatography,HPLC-FLD)測(cè)定母乳中唾液酸N-乙酰神經(jīng)氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(N-glycolyl neuraminic acid,Neu5Gc)含量的分析方法。利用酸水解法釋放出母乳中的唾液酸,以4,5-亞甲二氧基-1,2-鄰苯二胺鹽(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)為衍生化試劑,50℃避光衍生150min,采用熒光高效液相色譜儀檢測(cè)。色譜條件:LiChrosorb RP-18柱(250mm×4mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-乙腈-超純水(7:8:85),流速0.9mL/min,進(jìn)樣體積10μL,柱溫30℃,熒光檢測(cè)器激發(fā)波長(zhǎng)373nm,發(fā)射波長(zhǎng)448nm。結(jié)果表明:唾液酸在50~400μmol/L范圍內(nèi)與唾液酸峰面積的線性關(guān)系良好,平均回收率為94.0%,精密度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為0.4%,穩(wěn)定性RSD為1.0%,重復(fù)性RSD為0.8%,Neu5Ac的最低檢出限為0.02μmol/L,Neu5Gc的最低檢出限位0.03μmol/L。該方法簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、靈敏度高,可廣泛用于奶粉、牛奶及母乳中唾液酸含量測(cè)定。
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