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親和層析法分離純化納豆激酶
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 128 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 劉柳,李南薇,郭勇
關(guān)鍵詞: 納豆激酶|分離純化|親和層析|纖維蛋白|酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

目的:以納豆激酶的作用底物纖維蛋白為配基制備親和層析膠,分離純化納豆激酶。方法:納豆桿菌發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨分段鹽析、透析得粗酶,在4℃條件親和層析法分離純化,利用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)對酶純度進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果:經(jīng)親和層析得納豆激酶為電泳純,純化倍數(shù)為8.3,回收率43.9%。純酶的最適pH值和溫度分別為pH7.0~9.0、50℃;溫度高于60℃纖溶酶活性迅速下降;在pH6.0~10.0范圍內(nèi)穩(wěn)定性好;Mg2+對其有微弱激活作用,Cu2+有顯著抑制作用。結(jié)論:以瓊脂糖包埋纖維蛋白制備的層析膠可用于納豆激酶的快速分離純化。

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