為建立原生質(zhì)體融合法選育高產(chǎn)L-乳酸米根霉(Rhizopus oryzae)菌株,對(duì)米根霉菌株原生質(zhì)體制備及再生條件進(jìn)行研究。考察酶種類(lèi)、酶質(zhì)量濃度、時(shí)間、溫度、pH值、滲透壓、預(yù)處理等因素對(duì)原生質(zhì)體制得量及再生率的影響,獲得原生質(zhì)體制備及其再生的優(yōu)良條件:不添加甘氨酸,滲透壓穩(wěn)定劑為0.6mol/L的NaCl緩沖液,按1.5mg/mL組合酶質(zhì)量濃度,蝸牛酶、纖維素酶和溶壁酶質(zhì)量濃度配比為1:1:1進(jìn)行混合,35℃、pH6、酶解2h,可獲得原生質(zhì)體制得量最大為2.74×106個(gè)/mL,再生率最高為6.8%。
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