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大腸桿菌中表達(dá)Cry1C基因及其重組表達(dá)產(chǎn)物的純化及復(fù)性
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 172 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 曹思碩,許文濤,冉文君,梁立興賀曉云,羅云波,元延芳,黃昆侖
關(guān)鍵詞: 純化|復(fù)性折疊|Cry1C蛋白|稀有密碼子|包涵體|抗蟲基因|表達(dá)
摘要:

通過(guò)PCR方法將蘇云金芽孢桿菌Cry1C基因從原始質(zhì)粒中克隆出來(lái)。由于Cry1C基因攜帶了大量大腸桿菌稀有密碼子,因此用PCR方法對(duì)其前86個(gè)密碼子進(jìn)行修改,以提高其在大腸桿菌BL21(DE3)中的表達(dá)量。Cry1C蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中以包涵體形式大量表達(dá),將包涵體用8mol/L尿素溶解并用His TrapTM FF凝膠柱純化。所得純化蛋白在復(fù)性緩沖液中復(fù)性折疊,最終得到可溶并有生物活性(由三化螟活性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證)的蛋白。Cry1C蛋白純度可達(dá)99.2%。

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