選取淺玫瑰鏈霉菌、紅色糖多孢菌及黑曲霉為發(fā)酵菌種,采用Plackett-Burman設(shè)計及正交試驗,對影響微生物發(fā)酵法產(chǎn)大豆異黃酮苷元(染料木黃酮、黃豆苷元、黃豆黃素)的連續(xù)超聲波提取工藝的主要試驗因素進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化。以淺玫瑰鏈霉菌為發(fā)酵菌種的實驗結(jié)果表明:各主要試驗因素對3種異黃酮苷元提取率影響程度大小為:抽提溶劑組分、超聲波時間、淋洗液體積。而溫度、溶劑流速兩個因素與提取效率負(fù)相關(guān)。連續(xù)超聲波作用時間及抽提溶劑組分為影響異黃酮苷元提取工藝的兩個主要影響因素。當(dāng)兩因素的最優(yōu)值分別為7min及70%時,總異黃酮苷元提取率為(98.7±1.23)%。通過固相萃取(SPE)可有效去除發(fā)酵提取液中雜質(zhì)對HPLC定量分析的干擾,并使3種異黃酮苷元含量濃縮10倍以上,從而使HPLC方法的檢測限達(dá)到10-3μg/mL,樣品總分析時間小于10min,樣品回收率為96.2%~103.4%,RSD值小于2.34%。上述結(jié)果表明,該方法可滿足微生物發(fā)酵法產(chǎn)大豆異黃酮苷元的高效提取純化及快速定量分析。
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