采用單甲氧基聚乙二醇(mPEG)和右旋糖苷對(duì)生姜蛋白酶進(jìn)行大分子結(jié)合修飾。在酶液質(zhì)量濃度為2.0mg/mL的硼酸緩沖液中,加入三聚氯氰活化的mPEG 或高碘酸鈉活化的右旋糖苷,于40℃修飾反應(yīng)1h,對(duì)修飾劑與酶蛋白的質(zhì)量比和pH 值條件進(jìn)行優(yōu)化:mPEG 與酶的質(zhì)量比為17.5:1.0、pH9.0,mPEG 修飾酶的修飾率為52.6%,相對(duì)酶活力(修飾酶活力/ 天然酶活力)為54.0%;右旋糖苷與酶的質(zhì)量比為42:1、pH6.0,右旋糖苷修飾酶的修飾率為51.6%,其相對(duì)酶活力為原天然酶的3.3 倍。兩種修飾酶的熱穩(wěn)定性均比天然酶顯著增強(qiáng),且右旋糖苷修飾酶的熱穩(wěn)定性明顯高于mPEG 修飾酶。結(jié)果表明:右旋糖苷對(duì)生姜蛋白酶的修飾效果優(yōu)于聚乙二醇,適用于酶蛋白的化學(xué)修飾與新型酶制劑的開發(fā)利用。
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