采用PCR 技術(shù)從pEGFPpA-CAN 克隆載體中擴增出增強型綠色熒光蛋白基因(EGFP),插入到pGEM-T easy載體中,構(gòu)建pGT-EGFP 重組質(zhì)粒,其中的SP6 啟動子可用來表達EGFP 蛋白。攜帶pGT-EGFP 重組載體的DH5α大腸桿菌較普通DH5α大腸桿菌菌液略帶淡綠色,在熒光顯微鏡下能夠清晰觀察該大腸桿菌的形態(tài),帶有綠色熒光。同時超聲裂解攜帶pGT-EGFP 重組載體的DH5α大腸桿菌,提取菌體總蛋白,SDS-PAGE 顯示EGFP 蛋白是以可溶性蛋白形式存在的,分子質(zhì)量大約為30kD,與其理論值大小一致。
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