領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
根據(jù)Genbank 公布的河豚魚細胞色素b 基因序列，應(yīng)用軟件Primer Premier 5.00 版設(shè)計了7 對引物，經(jīng)過PCR 篩選，確定可以在所有8 個供試河豚魚樣品中檢出目的DNA 片段的引物HT-1，用于建立河豚魚的PCR 檢測方法。對該PCR 方法中6 個因素包括退火溫度、Mg2+ 終濃度、Taq DNA 聚合酶用量、dNTPs 終濃度、引物終濃度和模板DNA 用量進行優(yōu)化，確定優(yōu)化的PCR 擴增體系：10 × PCR 緩沖液2μL，MgCl2 終濃度1.5mmol/L，Taq DNA 聚合酶1.0U，dNTPs 終濃度300μmol/L，引物終濃度0.2μmol/L，DNA 模板400ng，加純水至總體積20μL。擴增程序定為94℃預(yù)變性5min，94℃變性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s，40 個循環(huán)，72℃延伸5min。據(jù)此建立河豚魚成分PCR 檢測方法，并通過河豚魚與非河豚魚的PCR 檢測結(jié)果比較，驗證了該方法的河豚魚特異性。研究結(jié)果還表明，該方法的檢出限為0.1%，含量為0.1% 的河豚魚樣品PCR 檢出率至少在97.5% 以上。
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