采用混合酸酐法合成30:1~10:1 三個(gè)不同起始物質(zhì)的量比的氯霉素免疫抗原(HAP-KLH),采用活潑酯法(EDC-NHS)合成40:1~1:1 七個(gè)不同起始物質(zhì)的量比的包被抗原(HAP-OVA),紫外測(cè)定HAP-KLH 偶聯(lián)比25:1~8:1,HAP-OVA 偶聯(lián)比23:1~1:3。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA 實(shí)驗(yàn)優(yōu)化包被抗原,在23:1~3:1 偶聯(lián)比范圍內(nèi),氯霉素(CAP) IC50值為36~15ng/mL,隨著偶聯(lián)比的減小而降低,當(dāng)偶聯(lián)比低于3:1 則略為上升。確定了包被抗原HAP-OVA 最佳偶聯(lián)比為3:1。本研究表明包被抗原的偶聯(lián)比對(duì)ELISA 測(cè)定IC50 值有重要影響,應(yīng)合成不同偶聯(lián)比的包被抗原,選出最佳偶聯(lián)比。
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