為了制備高活性ACE 抑制肽,研究兩步法高活性酪蛋白ACE 抑制肽的制備工藝條件參數(shù)。利用枯草桿菌堿性蛋白酶55℃水解酪蛋白6h 制備酪蛋白ACE 抑制肽,IC50 為38.6μg/mL;采用相同的酶進(jìn)行Plastein 反應(yīng)來修飾酪蛋白ACE 抑制肽,并應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化修飾反應(yīng)條件。固定酪蛋白ACE 抑制肽質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35%,以ACE 抑制肽的游離氨基減少量為指標(biāo),優(yōu)化的修飾反應(yīng)條件為酶添加量7.7kU/g 蛋白質(zhì)、溫度42.7℃、反應(yīng)時(shí)間6h,在此條件下,酪蛋白ACE 抑制肽的游離氨基減少量達(dá)到179.72μmol/g 蛋白質(zhì)。ACE 抑制活性分析結(jié)果表明,修飾后ACE 抑制肽的抑制活性顯著提高且與修飾反應(yīng)程度相關(guān),IC50 可降0.5μg/mL。
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